ACTA1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400005-NIC

ACTA1 codifica l’actina alfa del muscolo scheletrico, un componente principale del filamento sottile sarcomerico che polimerizza in F-actina per supportare l’assemblaggio delle miofibrille, la generazione di forza e la meccanotrasduzione. Le dinamiche dell’actina guidate da ACTA1 si integrano con il ciclo dei ponti trasversali actina–miosina, con l’organizzazione del disco Z e con le vie di rimodellamento del citoscheletro che regolano la struttura della fibra muscolare e la performance contrattile. Varianti patogene o un’espressione deregolata di ACTA1 sono associate a malattie ereditarie del muscolo scheletrico, incluse le miopatie congenite, nelle quali alterazioni della stabilità dei filamenti e della meccanica contrattile contribuiscono alla disfunzione cellulare. In quanto marcatore e nodo funzionale nella biologia muscolare, ACTA1 è ampiamente studiato in modelli di miogenesi, nella biogenesi del sarcomero e nelle risposte allo stress del citoscheletro.

ACTA1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ACTA1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ACTA1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ACTA1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ACTA1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.