ACSS1 Plasmide Double Nickase (h): sc-403211-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ACSS1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ACSS1 Double Nickase Plasmid (h) e il ACSS1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ACSS1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ACSS1 Antibody (D-7): sc-377149
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ACSS1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403211-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ACSS1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403211-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACSS1 codifica una acil-CoA sintetasi mitocondriale che catalizza la conversione dell’acetato in acetil-CoA, collegando l’utilizzo dell’acetato al metabolismo energetico mitocondriale e al flusso anaplerotico attraverso il ciclo dell’acido citrico (TCA). Fornendo acetil-CoA per il metabolismo ossidativo e supportando vie associate ai lipidi e ai corpi chetonici, ACSS1 contribuisce alla flessibilità metabolica in condizioni di stress nutrizionale e di alterata disponibilità di substrati. La disregolazione del metabolismo dell’acetato e della produzione mitocondriale di acetil-CoA è rilevante negli studi sulla riprogrammazione metabolica osservata nella biologia del cancro, nella resistenza all’insulina e in altri disturbi caratterizzati da un metabolismo ossidativo compromesso. ACSS1 rappresenta quindi un bersaglio utile per indagare la scelta dei substrati da parte dei mitocondri, la compartimentalizzazione dell’acetil-CoA e gli effetti a valle sull’equilibrio redox e sulla bioenergetica cellulare.
ACSS1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ACSS1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ACSS1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ACSS1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ACSS1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.