ACSL4 Plasmide Double Nickase (h): sc-401649-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ACSL4 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ACSL4 Double Nickase Plasmid (h) e il ACSL4 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ACSL4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ACSL4 Antibody (F-4): sc-365230
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ACSL4 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401649-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ACSL4 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401649-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACSL4 (acyl-CoA sintetasi a catena lunga, membro della famiglia 4) è un enzima associato alla membrana che attiva preferenzialmente gli acidi grassi polinsaturi, inclusa l’acido arachidonico, convertendoli in tioesteri acil-CoA per il loro inserimento nei fosfolipidi. Modulando il rimodellamento dei fosfolipidi e la dinamica delle goccioline lipidiche, ACSL4 influenza la disponibilità dei precursori degli eicosanoidi e reti più ampie di segnalazione lipidica. L’attività di ACSL4 è strettamente collegata alla biologia redox e alla suscettibilità alla ferroptosi attraverso l’arricchimento di fosfolipidi contenenti PUFA perossidabili, intersecando vie che controllano lo stress ossidativo e l’integrità di membrana. Alterazioni dell’espressione o della funzione di ACSL4 sono state associate a una deregolazione del metabolismo lipidico e a contesti di biologia del cancro, neurobiologia e segnalazione infiammatoria, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici.
ACSL4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ACSL4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ACSL4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ACSL4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ACSL4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.