ACSL1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402922-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ACSL1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ACSL1 Double Nickase Plasmid (h) e il ACSL1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ACSL1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ACSL1 Antibody (3G4): sc-293281
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ACSL1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402922-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ACSL1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402922-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACSL1 (acyl‑CoA sintetasi, membro 1 della famiglia per le catene lunghe) catalizza l’attivazione, dipendente da ATP, degli acidi grassi a catena lunga ad acil‑CoA, un passaggio obbligato che convoglia i lipidi verso la β‑ossidazione mitocondriale, la sintesi di trigliceridi e fosfolipidi e la segnalazione mediata da lipidi. Controllando la composizione del pool di acil‑CoA, ACSL1 influenza il rimodellamento delle membrane, la dinamica delle goccioline lipidiche e l’accoppiamento metabolico tra l’ingresso degli acidi grassi e le successive vie di ossidazione o di stoccaggio. La sua attività è strettamente collegata a programmi metabolici regolati da PPAR e a reti più ampie che governano sensibilità all’insulina, infiammazione e omeostasi energetica cellulare. Alterazioni dell’espressione o della regolazione di ACSL1 sono state associate a disfunzioni metaboliche e a fenotipi guidati dai lipidi rilevanti per obesità, diabete di tipo 2 e biologia cardiovascolare, a supporto di studi meccanicistici in modelli cellulari pertinenti alla malattia.
ACSL1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ACSL1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ACSL1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ACSL1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ACSL1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.