Plasmide CRISPR d'Activation (h) ACE2: sc-401131-ACT

L’enzyme de conversion de l’angiotensine 2 (ACE2) est une métalloprotéase membranaire humaine de type I qui contrebalance la signalisation classique du système rénine–angiotensine en convertissant l’angiotensine II en angiotensine-(1–7), déplaçant ainsi la signalisation vers des voies liées au récepteur MAS. En régulant des peptides vasoactifs, ACE2 influence l’homéostasie endothéliale, la signalisation inflammatoire, les réponses au stress oxydatif et le remodelage tissulaire dans les systèmes cardiovasculaire, rénal et pulmonaire. ACE2 sert également de facteur d’entrée à la surface cellulaire pour certains coronavirus, ce qui relie ses niveaux d’expression aux études des interactions hôte–pathogène et de la biologie de la barrière épithéliale. Une activité ou une expression d’ACE2 dérégulée est fréquemment étudiée dans des modèles d’hypertension, de maladie cardiovasculaire, de lésions pulmonaires aiguës et chroniques, de maladie rénale et d’inflammation métabolique.

ACE2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ACE2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ACE2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ACE2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ACE2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ACE2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ACE2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ACE2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ACE2 dans les cellules tumorales présentant une expression de ACE2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.