ACBP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419950

Panoramica

Dbi codifica la proteina legante l’acil-CoA (ACBP), uno chaperone lipidico conservato che lega esteri di acil-CoA a catena media e lunga e ne regola la disponibilità intracellulare. Nelle cellule di topo, ACBP sostiene il traffico degli acidi grassi e l’omeostasi metabolica influenzando la β-ossidazione, la sintesi lipidica e il rimodellamento dei lipidi di membrana, e può modulare reti di segnalazione legate al bilancio energetico e alle risposte cellulari allo stress. Attraverso queste funzioni, DBI/ACBP è comunemente studiata in vie che collegano il metabolismo lipidico alla funzione mitocondriale, all’autofagia e all’infiammazione. Una gestione disregolata degli acil-CoA e dei flussi lipidici è rilevante in modelli di disfunzione metabolica, neurobiologia e dipendenza delle cellule tumorali dai lipidi, rendendo Dbi un bersaglio utile per studi meccanicistici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ACBP (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Dbi in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Dbi insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Dbi a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ACBP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Dbi per lo studio della segnalazione di ACBP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Dbi critici per la funzione di ACBP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Dbi per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ACBP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ACBP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Dbi. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ACBP Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ACBP (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Dbi per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Dbi definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.