ACAA2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403173-ACT

ACAA2 codifica la 3-chetoacil-CoA tiolasi mitocondriale, un enzima chiave della spirale della β-ossidazione degli acidi grassi che catalizza la scissione tiolitica degli intermedi 3-chetoacil-CoA per generare acetil-CoA. Controllando la produzione di acetil-CoA, ACAA2 collega il catabolismo lipidico al metabolismo energetico mitocondriale, all’equilibrio redox e a reti più ampie di segnalazione metabolica. Un’alterata espressione o attività di ACAA2 è stata associata al rimodellamento metabolico e alla disfunzione mitocondriale osservati in diversi disturbi che coinvolgono la gestione dei lipidi e il metabolismo ossidativo, inclusi contesti di malattie cardiometaboliche e neurodegenerative. In quanto enzima della matrice mitocondriale, è inoltre rilevante per studi sull’omeostasi dell’organello, sulle risposte allo stress e sulla regolazione dell’espressione genica guidata dai metaboliti.

ACAA2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ACAA2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ACAA2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ACAA2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ACAA2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ACAA2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ACAA2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ACAA2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ACAA2 nelle cellule tumorali con espressione di ACAA2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.