ABHD14B Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-410211-LAC

ABHD14B (abhydrolase domain containing 14B) codifica una proteina della famiglia delle idrolasi della serina, implicata nella regolazione del metabolismo cellulare dei lipidi e di piccole molecole attraverso l’idrolisi di legami estere/ammidici. In quanto membro della superfamiglia con fold α/β-idrolasi, ABHD14B è in grado di influenzare l’omeostasi metabolica, la gestione dei lipidi associata agli organelli e i processi di segnalazione a valle, che possono intersecarsi con risposte allo stress e vie infiammatorie. L’espressione e le variazioni funzionali degli enzimi della famiglia ABHD sono state associate ad alterazioni della bioenergetica e al rimodellamento dei lipidi di membrana, caratteristiche frequentemente osservate nella disfunzione metabolica e in stati cellulari rilevanti per il cancro. Di conseguenza, ABHD14B rappresenta un nodo accessibile per studi meccanicistici che collegano l’attività idrolasica a fenotipi a livello di via in modelli cellulari umani.

Le particelle di attivazione lentivirale ABHD14B (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ABHD14B in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ABHD14B (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ABHD14B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ABHD14B. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ABHD14B e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.