ABCG2 Plasmide Double Nickase (h): sc-416737-NIC

ABCG2 (nota anche come BCRP) codifica un trasportatore di efflusso della famiglia ATP-binding cassette che limita l'accumulo intracellulare di una vasta gamma di xenobiotici e metaboliti endogeni. Localizzata alla membrana plasmatica in popolazioni cellulari di barriera e con caratteristiche staminali, ABCG2 contribuisce al trasporto epiteliale, alla detossificazione cellulare e alla protezione dallo stress ossidativo e chimico attraverso l'esportazione di substrati dipendente dall'ATP. La sua attività si integra con i processi farmacocinetici e con i programmi di risposta allo stress modulando l'esposizione intracellulare a piccole molecole e a metaboliti correlati alle porfirine. Un'espressione o una funzione disregolata di ABCG2 è spesso studiata nel contesto di fenotipi di resistenza multidrug, della biologia delle barriere tissutali e dell'eterogeneità tumorale, nonché di varianti ereditarie che influenzano l'attività del trasportatore.

ABCG2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ABCG2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ABCG2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ABCG2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ABCG2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.