Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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53BP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m2): sc-424212-KO-2
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- 53BP1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m2) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico 53BP1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: p-53BP1 Antibody (38.Ser 25): sc-135748
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
53BP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m2) | sc-424212-KO-2 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Trp53bp1 codifica 53BP1, un mediatore della risposta al danno al DNA associato alla cromatina, rapidamente reclutato alle rotture a doppio filamento tramite il riconoscimento di marcatori istonici e segnali mediati dall’ubiquitina. 53BP1 promuove il non-homologous end joining (NHEJ) e limita la resezione delle estremità del DNA, influenzando così la scelta della via di riparazione tra NHEJ e ricombinazione omologa. Coordina la segnalazione dei checkpoint, la stabilità genomica e la ricombinazione di switch di classe nelle cellule B, e la sua disfunzione è associata a un aumento dell’instabilità cromosomica e a risposte alterate allo stress replicativo. Nei modelli murini, l’alterazione di Trp53bp1 è ampiamente utilizzata per studiare il mantenimento del genoma, le reti oncosoppressorie e l’equilibrio tra vie di riparazione associate a BRCA1.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO 53BP1 (m2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Trp53bp1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Trp53bp1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Trp53bp1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina 53BP1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Trp53bp1 per lo studio della segnalazione di 53BP1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Trp53bp1 critici per la funzione di 53BP1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Trp53bp1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal 53BP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal 53BP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Trp53bp1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal 53BP1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR 53BP1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Trp53bp1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Trp53bp1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.