5-LO Plasmide Double Nickase (m): sc-419091-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- 5-LO Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il 5-LO Double Nickase Plasmid (m) e il 5-LO Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Alox5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: 5-LO Antibody (33): sc-136195
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
5-LO Plasmide Double Nickase (m) | sc-419091-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Alox5 codifica la 5-lipossigenasi (5-LO), una diossigenasi a ferro non-eme che catalizza le prime tappe irreversibili della biosintesi dei leucotrieni a partire dall’acido arachidonico. In collaborazione con FLAP (ALOX5AP), la 5-LO genera LTA4, che viene poi ulteriormente convertito in LTB4 e nei leucotrieni cisteinilici, mediatori lipidici chiave che modulano il reclutamento dei leucociti, la permeabilità vascolare e la segnalazione dell’immunità innata. L’attività di ALOX5 è regolata dalla traslocazione alla membrana dipendente dal calcio e dalla fosforilazione, integrando vie guidate dai recettori che modulano i programmi genici dell’infiammazione. Una segnalazione 5-LO/leucotrieni deregolata è stata collegata a modelli di infiammazione delle vie aeree di tipo asmatico, aterosclerosi, neuroinfiammazione e fenotipi mieloidi associati al tumore, rendendo Alox5 un nodo utile per studiare le reti degli eicosanoidi.
5-LO Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Alox5 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Alox5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Alox5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Alox5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.