4.1B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420186

Panoramica

Epb41l3 codifica la proteina 4.1B, un adattatore citoscheletrico associato alla membrana che collega le proteine transmembrana alla rete corticale actina–spettrina e contribuisce a organizzare forma cellulare, polarità e adesione. Nei tessuti murini, la 4.1B favorisce la stabilità di membrana e l’architettura delle giunzioni, influenzando processi quali la crescita dei neuriti, la migrazione cellulare e la segnalazione dipendente dal contatto. Grazie alle sue funzioni di scaffold, la 4.1B può modulare la distribuzione di recettori e molecole di adesione, con effetti sulle vie di rimodellamento del citoscheletro e sulla meccanotrasduzione. Un’alterata regolazione di EPB41L3/4.1B è stata associata, in modelli sperimentali, a una disorganizzazione tissutale e a fenotipi rilevanti per la soppressione tumorale, l’invasione e l’omeostasi neurologica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO 4.1B (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Epb41l3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Epb41l3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Epb41l3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina 4.1B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Epb41l3 per lo studio della segnalazione di 4.1B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Epb41l3 critici per la funzione di 4.1B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Epb41l3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal 4.1B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal 4.1B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Epb41l3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal 4.1B Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR 4.1B (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Epb41l3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Epb41l3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.