ΔN p73 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-437274-ACT

La ΔN p73 umana è un’isoforma di TP73 tronca all’estremità N-terminale che modula programmi trascrizionali coinvolti nel controllo della progressione del ciclo cellulare, nella resistenza all’apoptosi, nella differenziazione e nelle risposte cellulari allo stress. Poiché è priva del dominio di transattivazione canonico, ΔN p73 può agire in modo dominante-negativo nei confronti dei membri della famiglia di p53, rimodellando le reti di segnalazione a valle che regolano le risposte al danno al DNA e l’apoptosi mitocondriale. Un’alterazione dell’espressione di ΔN p73 è stata collegata a fenotipi di proliferazione e sopravvivenza deregolati in molteplici contesti rilevanti per la malattia, inclusi la biologia dei tumori e i processi di neurosviluppo. La sua attività interseca il controllo dei checkpoint, la regolazione della cromatina e l’espressione genica specifica di linea, rendendola un nodo utile per studiare il riassetto delle vie della famiglia di p53.

ΔN p73 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ΔN p73 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione , dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ΔN p73. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ΔN p73 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ΔN p73 nelle cellule tumorali con espressione di silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.