βB2-crystallin Plasmide Double Nickase (h): sc-403626-NIC

CRYBB2 codifica la βB2-cristallina umana, una delle principali proteine strutturali del cristallino oculare, che sostiene l’architettura delle cellule delle fibre del cristallino e la trasparenza a lungo termine. In quanto membro della superfamiglia delle β/γ-cristalline, la βB2-cristallina contribuisce all’elevata densità proteica e alle proprietà rifrattive, mantenendo al contempo la proteostasi tramite interazioni di tipo chaperone che limitano l’aggregazione in condizioni di stress ossidativo e legato all’invecchiamento. Un’alterata espressione di CRYBB2 o la destabilizzazione della proteina sono associate a un’omeostasi del cristallino compromessa e a fenotipi correlati alla cataratta, rendendolo un modello utile per studiare la stabilità proteica, le risposte allo stress e i programmi di differenziamento del cristallino. La βB2-cristallina offre inoltre un sistema maneggevole per indagare come le reti di cristalline conservate rispondano allo squilibrio redox e allo stress proteotossico in contesti cellulari oculari e non oculari.

βB2-crystallin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CRYBB2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CRYBB2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CRYBB2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CRYBB2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.