α-sarcoglycan Plasmide Double Nickase (m): sc-422904-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- α-sarcoglycan Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il α-sarcoglycan Double Nickase Plasmid (m) e il α-sarcoglycan Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Sgca. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: α-sarcoglycan Antibody (D-7): sc-271321
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
α-sarcoglycan Plasmide Double Nickase (m) | sc-422904-NIC | 20 µg | $410.00 |
Sgca codifica l’α-sarcoglicano, un componente centrale del sottocomplesso dei sarcoglicani all’interno del complesso distrofina–glicoproteine, che stabilizza la membrana della fibra muscolare e collega il citoscheletro alla matrice extracellulare. Nel muscolo scheletrico e cardiaco, l’α-sarcoglicano sostiene l’integrità del sarcolemma durante la contrazione e contribuisce alle vie di meccanotrasduzione che influenzano la gestione del calcio, la riparazione di membrana e l’organizzazione del citoscheletro. L’alterazione dell’architettura dipendente dai sarcoglicani favorisce la fragilità di membrana, la degenerazione delle miofibre e un rimodellamento cronico, rendendo Sgca un locus ampiamente utilizzato per modellare la disfunzione del complesso distrofina–glicoproteine. La perturbazione di Sgca nel topo è quindi rilevante per studiare l’omeostasi muscolare, le risposte allo stress e le vie associate a fenotipi simili alla distrofia muscolare.
α-sarcoglycan Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Sgca nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Sgca. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Sgca. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Sgca interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.