αENaC Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422825

Panoramica

Scnn1a codifica la subunità alfa del canale epiteliale del sodio (αENaC), un componente limitante della velocità dell’assorbimento di Na⁺ sensibile all’amiloride attraverso le membrane apicali delle vie aeree, del rene e di altri epiteli. αENaC si assembla con le subunità β e γ per controllare il trasporto transepiteliale di sodio, influenzando così l’omeostasi del liquido di superficie delle vie aeree e l’equilibrio renale del sodio. L’attività del canale è regolata tramite attivazione proteolitica e turnover dipendente dall’ubiquitina, con un ruolo di primo piano dell’endocitosi mediata da Nedd4-2 e di segnali ormonali che modulano la gestione del sodio. La disregolazione del trasporto ionico dipendente da ENaC è ampiamente utilizzata come quadro meccanicistico per studiare, in modelli murini, lo squilibrio dei fluidi epiteliali, la disidratazione del muco e la fisiologia sensibile al sale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO αENaC (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Scnn1a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Scnn1a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Scnn1a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina αENaC.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Scnn1a per lo studio della segnalazione di αENaC, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Scnn1a critici per la funzione di αENaC
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Scnn1a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal αENaC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal αENaC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Scnn1a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal αENaC Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR αENaC (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Scnn1a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Scnn1a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.