α-actinin-4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h2): sc-400548-KO-2

Panoramica

ACTN4 codifica l’α-actinina-4, una proteina di crosslinking dei filamenti di actina insensibile al calcio, che si localizza nelle adesioni focali, nelle fibre di stress e nelle giunzioni cellula–cellula, regolando l’architettura del citoscheletro e la segnalazione meccanica. Organizzando le reti di F-actina e collegandole a complessi associati alle integrine, l’α-actinina-4 contribuisce all’adesione cellulare, allo spreading, alla migrazione e alle variazioni della rigidità cellulare che influenzano vie come la segnalazione delle Rho GTPasi e la meccanotrasduzione. Oltre ai suoi ruoli citoplasmatici, l’α-actinina-4 è stata implicata anche in funzioni nucleari, inclusa la modulazione di programmi trascrizionali tramite interazioni proteina–proteina. Un’espressione deregolata di ACTN4 o mutazioni a suo carico sono state associate a disfunzione dei podociti renali (inclusa la glomerulosclerosi focale e segmentaria) e a fenotipi invasivi in molteplici tipi di tumore, a supporto della sua rilevanza per studi sul controllo del citoscheletro e sul comportamento cellulare legato alla malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO α-actinin-4 (h2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ACTN4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ACTN4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ACTN4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina α-actinin-4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ACTN4 per lo studio della segnalazione di α-actinin-4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ACTN4 critici per la funzione di α-actinin-4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ACTN4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal α-actinin-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal α-actinin-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ACTN4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal α-actinin-4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR α-actinin-4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ACTN4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ACTN4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.