α-actinin-4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2): sc-400548-KO-2

Visão geral

ACTN4 codifica a α-actinina-4, uma proteína de ligação cruzada de filamentos de actina, insensível ao cálcio, que se localiza em adesões focais, fibras de estresse e junções célula–célula para regular a arquitetura do citoesqueleto e a sinalização mecânica. Ao organizar redes de F-actina e conectá-las a complexos associados a integrinas, a α-actinina-4 contribui para a adesão celular, o espalhamento, a migração e alterações na rigidez celular que influenciam vias como a sinalização por GTPases Rho e a mecanotransdução. Além de suas funções citoplasmáticas, a α-actinina-4 também tem sido implicada em funções nucleares, incluindo a modulação de programas transcricionais por meio de interações proteína–proteína. A desregulação da expressão de ACTN4 ou mutações nesse gene tem sido associada à disfunção de podócitos renais (incluindo glomeruloesclerose segmentar e focal) e a fenótipos invasivos em múltiplos tipos de tumores, reforçando sua relevância para estudos de controle do citoesqueleto e de comportamento celular ligado a doenças.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO α-actinin-4 (h2) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene ACTN4 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do ACTN4, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do ACTN4 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína α-actinin-4.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de ACTN4 para a investigação da sinalização de α-actinin-4, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) ACTN4 críticos para a função α-actinin-4
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos ACTN4 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo α-actinin-4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo α-actinin-4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus ACTN4. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo α-actinin-4 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR α-actinin-4 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia ACTN4 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo ACTN4 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.