Plásmido CRISPR de Activación (h) α1a Tubulin: sc-400022-ACT

TUBA1A codifica la tubulina humana α1a, un componente central de los heterodímeros de tubulina α/β que se polimerizan para formar microtúbulos, los cuales sostienen la arquitectura del citoesqueleto, el transporte intracelular y la formación del huso mitótico. La dinámica de los microtúbulos impulsada por la tubulina α1a contribuye a la polaridad celular, el crecimiento axonal y la migración neuronal, e integra su función con vías que controlan la remodelación del citoesqueleto, la progresión del ciclo celular y el tráfico mediado por proteínas motoras. La desregulación de la función de TUBA1A se asocia con fenotipos del neurodesarrollo vinculados a un ensamblaje deficiente de microtúbulos y a conectividad neuronal alterada, lo que la convierte en un marcador útil para estudiar la integridad del citoesqueleto en sistemas neuronales. Como proteína estructural de amplia expresión, la tubulina α1a se utiliza con frecuencia en ensayos que evalúan la estabilidad de los microtúbulos, el posicionamiento de orgánulos y los cambios del citoesqueleto asociados a la diferenciación.

α1a Tubulin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TUBA1A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

α1a Tubulin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TUBA1A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TUBA1A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de α1a Tubulin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TUBA1A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de α1a Tubulin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía α1a Tubulin en células tumorales con expresión de TUBA1A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.