ZPR1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-409727-ACT

ZPR1 umano (zinc finger protein ZPR1) è un fattore contenente dita di zinco, espresso in modo ubiquitario, che si lega alle tirosin-chinasi recettoriali e si associa ai complessi SMN per supportare il metabolismo dell’RNA. Contribuisce al mantenimento dell’architettura nucleare e all’assemblaggio delle ribonucleoproteine, influenzando programmi trascrizionali e processi legati al ciclo cellulare che modellano la proliferazione e le risposte allo stress. La funzione di ZPR1 interseca vie che regolano l’elaborazione dell’RNA e l’espressione genica dipendente dai segnali, rendendola rilevante per studi sulla proteostasi e sulla vulnerabilità neuronale. Alterazioni dell’espressione di ZPR1 sono state associate a fenotipi correlati ai motoneuroni e alla biologia legata a SMN, a supporto dell’indagine del suo ruolo in meccanismi cellulari rilevanti per la neurodegenerazione, senza implicare esiti clinici.

ZPR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ZPR1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ZPR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ZPR1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ZPR1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ZPR1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ZPR1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ZPR1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ZPR1 nelle cellule tumorali con espressione di ZPR1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.