ZNF326 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404968-ACT

ZNF326 codifica una proteina nucleare contenente dita di zinco, implicata nella regolazione della trascrizione e nel processamento dell’RNA, con ruoli riportati nel coordinare lo splicing co-trascrizionale e programmi di espressione genica che supportano il mantenimento dello stato cellulare. In quanto fattore associato alla cromatina, ZNF326 può influenzare l’architettura regolatoria in prossimità dei promotori e l’accoppiamento tra trascrizione e maturazione del pre-mRNA, collegandosi così a vie che governano proliferazione, differenziamento ed espressione genica adattativa allo stress. Un’espressione o un’attività deregolata di ZNF326 è stata associata in letteratura a reti trascrizionali alterate nella biologia dei tumori e in altri contesti in cui un metabolismo dell’RNA aberrante contribuisce ai fenotipi di malattia. Queste caratteristiche rendono ZNF326 un bersaglio utile per studi meccanicistici sul crosstalk tra trascrizione e splicing e sul rimodellamento delle reti regolatorie.

ZNF326 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ZNF326 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ZNF326 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ZNF326 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ZNF326, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ZNF326. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ZNF326 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ZNF326 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ZNF326 nelle cellule tumorali con espressione di ZNF326 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.