ZIP7 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-409465-ACT

SLC39A7 codifica ZIP7, un trasportatore di zinco localizzato nel reticolo endoplasmatico e nell’apparato di Golgi che regola il rilascio di Zn2+ nel citosol per mantenere l’omeostasi degli ioni metallici. Controllando l’attività enzimatica e la segnalazione dipendenti dallo zinco, ZIP7 influenza processi che includono il ripiegamento delle proteine nella via secretoria, le risposte allo stress del RE e le cascate di fosforilazione collegate a proliferazione e sopravvivenza. L’alterazione del flusso di zinco mediato da ZIP7 è stata associata a una segnalazione dei fattori di crescita modificata e a una disregolazione dell’adattamento cellulare allo stress in diversi contesti patologici, incluse vie legate al cancro. In quanto nodo centrale della segnalazione dello zinco, ZIP7 è spesso studiato per il suo impatto su programmi trascrizionali, proteostasi e riprogrammazione metabolica.

ZIP7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SLC39A7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ZIP7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SLC39A7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SLC39A7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ZIP7. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SLC39A7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ZIP7 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ZIP7 nelle cellule tumorali con espressione di SLC39A7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.