ZIP7 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-409465-ACT

SLC39A7 kodiert ZIP7, einen im endoplasmatischen Retikulum und im Golgi-Apparat lokalisierten Zinktransporter, der die Freisetzung von Zn2+ ins Zytosol reguliert und so die Homöostase von Metallionen aufrechterhält. Durch die Kontrolle der Aktivität zinkabhängiger Enzyme und von Signalwegen beeinflusst ZIP7 Prozesse wie die Proteinfaltung im sekretorischen Weg, ER-Stressantworten sowie Phosphorylierungskaskaden, die mit Proliferation und Überleben verknüpft sind. Störungen des ZIP7-vermittelten Zinkflusses wurden in mehreren Krankheitskontexten mit veränderter Wachstumsfaktor-Signalgebung und einer dysregulierten Anpassung an zellulären Stress in Verbindung gebracht, einschließlich krebsassoziierter Signalwege. Als zentraler Knotenpunkt der Zinksignalgebung wird ZIP7 häufig hinsichtlich seines Einflusses auf Transkriptionsprogramme, Proteostase und metabolische Reprogrammierung untersucht.

ZIP7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SLC39A7-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ZIP7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SLC39A7-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SLC39A7-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ZIP7-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SLC39A7-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ZIP7-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ZIP7-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SLC39A7-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.