ZFP64 Plasmide Double Nickase (h): sc-410027-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ZFP64 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ZFP64 Double Nickase Plasmid (h) e il ZFP64 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ZFP64. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ZFP64 Antibody (F-3): sc-374263
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ZFP64 Plasmide Double Nickase (h) | sc-410027-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ZFP64 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-410027-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ZFP64 (proteina a dita di zinco 64) è un presunto fattore di trascrizione a dita di zinco C2H2 con dominio KRAB, implicato nel legame al DNA in modo sequenza-specifico e nella regolazione epigenetica dell’espressione genica. Reclutando complessi corepressori ed enzimi che modificano la cromatina, si ritiene che ZFP64 influenzi il silenziamento trascrizionale, il mantenimento dello stato della cromatina e i programmi di identità cellulare. Un’alterata regolazione delle reti di zinc finger KRAB è stata associata a differenziamento disregolato, instabilità genomica e stati trascrizionali oncogenici, rendendo ZFP64 rilevante per studi sulla regolazione genica associata al cancro e sul controllo dello sviluppo. Nelle cellule umane, l’analisi della funzione di ZFP64 supporta lo studio meccanicistico dei circuiti trascrizionali e delle vie dipendenti dalla cromatina.
ZFP64 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ZFP64 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ZFP64. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ZFP64. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ZFP64 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.