ZCCHC11 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-411714

Panoramica

ZCCHC11 (noto anche come TUT4) codifica una uridiltransferasi dell’RNA di tipo CCHC a dita di zinco che catalizza l’uridilazione terminale 3′ di diversi substrati di RNA, inclusi i precursori e i microRNA maturi e alcuni mRNA selezionati. Modificando le estremità 3′ degli RNA, ZCCHC11 influenza la stabilità dell’RNA e le vie di degradazione, la biogenesi dei miRNA e la regolazione genica post-trascrizionale, con un’interazione funzionale che coinvolge il controllo LIN28-dipendente dei miRNA della famiglia let-7. Questa attività collega ZCCHC11 a programmi regolatori che governano differenziamento, proliferazione e rimodellamento del trascrittoma in risposta allo stress. L’espressione o l’attività deregolata di ZCCHC11 è stata studiata in contesti di reti di miRNA aberranti e segnalazione oncogenica, rendendolo rilevante per studi meccanicistici in biologia del cancro e nel metabolismo dell’RNA.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ZCCHC11 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ZCCHC11 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ZCCHC11 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ZCCHC11 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ZCCHC11.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ZCCHC11 per lo studio della segnalazione di ZCCHC11, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ZCCHC11 critici per la funzione di ZCCHC11
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ZCCHC11 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ZCCHC11 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ZCCHC11 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ZCCHC11. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ZCCHC11 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ZCCHC11 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ZCCHC11 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ZCCHC11 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.