Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
ZAG Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419279
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ZAG Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico ZAG, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ZAG Antibody (F-6): sc-271957
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ZAG Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-419279 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Azgp1 codifica la zinc-α2-glicoproteina (ZAG), una glicoproteina secreta di tipo adipochina, espressa in molteplici tessuti, che contribuisce alla mobilizzazione sistemica dei lipidi e al bilanciamento energetico. Nelle reti metaboliche murine, ZAG è stata collegata alla regolazione della lipolisi negli adipociti, alla modulazione dell’utilizzo degli acidi grassi e al cross-talk con la segnalazione infiammatoria nei microambienti di tessuto adiposo e fegato. Un’espressione alterata di Azgp1/ZAG è frequentemente studiata nel contesto della disfunzione metabolica associata all’obesità e delle variazioni della sensibilità all’insulina, così come di fenotipi più ampi legati a cachessia e infiammazione. In quanto fattore circolante e associato alla matrice extracellulare, ZAG è inoltre rilevante nelle ricerche sul rimodellamento tissutale e sulla comunicazione intercellulare.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ZAG (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Azgp1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Azgp1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Azgp1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ZAG.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Azgp1 per lo studio della segnalazione di ZAG, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Azgp1 critici per la funzione di ZAG
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Azgp1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal ZAG CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ZAG CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Azgp1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal ZAG Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ZAG (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Azgp1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Azgp1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.