YY1 Plasmide Double Nickase (m): sc-423752-NIC

Il gene murino **Yy1** codifica il fattore di trascrizione multifunzionale **YY1**, una proteina a dita di zinco legante il DNA che può agire sia da attivatore sia da repressore della trascrizione a seconda del contesto della cromatina. YY1 partecipa alla comunicazione promotore–enhancer, al silenziamento genico associato ai complessi Polycomb e alla regolazione della trascrizione mediata dall’RNA polimerasi II, collegandosi così a processi quali controllo del ciclo cellulare, differenziamento e specificazione di linea. Attraverso interazioni con rimodellatori della cromatina e complessi che modificano gli istoni, YY1 influenza gli stati epigenetici e l’organizzazione del genoma, includendo ruoli nella funzione degli enhancer e nel looping della cromatina in 3D. Un’attività deregolata di YY1 è stata associata ad alterazioni dei programmi trascrizionali rilevanti per anomalie dello sviluppo, regolazione immunitaria e vie oncogeniche, rendendo **Yy1** un bersaglio ampiamente utilizzato per studi meccanicistici sulla regolazione genica.

YY1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Yy1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Yy1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Yy1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Yy1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.