X11α Plasmide Double Nickase (h): sc-405297-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- X11α Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il X11α Double Nickase Plasmid (h) e il X11α Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira APBA1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: X11α Antibody (A-12): sc-137022
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
X11α Plasmide Double Nickase (h) | sc-405297-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
X11α Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405297-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
APBA1 (X11α) è una proteina adattatrice neuronale che si lega alla proteina precursore dell’amiloide (APP) e coordina il traffico, lo smistamento e la segnalazione sinaptica delle proteine. Attraverso i suoi domini PTB e PDZ, X11α funge da impalcatura per complessi che influenzano l’esocitosi/endocitosi vescicolare e l’organizzazione postsinaptica, integrando processi rilevanti per la neurotrasmissione e l’omeostasi neuronale. APBA1 è stata collegata alla regolazione del processamento di APP e delle vie amiloidogeniche, rendendola un bersaglio ampiamente utilizzato per studi meccanicistici sulla neurodegenerazione e la disfunzione sinaptica. Alterazioni delle interazioni associate ad APBA1 sono state esplorate anche nel contesto di fenotipi cognitivi e della vulnerabilità neuronale, a supporto della sua rilevanza nei modelli di ricerca biomedica.
X11α Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus APBA1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di APBA1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di APBA1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con APBA1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.