Wolframin Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-403869-LAC

WFS1 codifica la wolframina, una proteina di membrana del reticolo endoplasmatico (RE) che sostiene l’omeostasi del RE e la proteostasi nelle cellule secretorie ed eccitabili. La wolframina modula la gestione del calcio e interagisce con la risposta alle proteine non correttamente ripiegate (unfolded protein response, UPR) e con la segnalazione dello stress del RE per mantenere un corretto ripiegamento e traffico delle proteine. Una funzione deregolata di WFS1 è associata a disfunzione delle cellule β e a vulnerabilità neuronale, collegando le vie dello stress del RE a fenotipi rilevanti per il diabete e la neurodegenerazione. Di conseguenza, WFS1 è ampiamente studiato in modelli di stress del RE, segnalazione del calcio, biologia della via secretoria e sopravvivenza cellulare in condizioni di stress proteotossico.

Le particelle di attivazione lentivirale Wolframin (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di WFS1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Wolframin (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione WFS1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Wolframin. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo WFS1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.