VRL-1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401648-LAC

TRPV2 codifica il recettore tipo vanilloide 1 (VRL-1), un canale cationico non selettivo permeabile al Ca²⁺ della superfamiglia TRP che risponde allo stress meccanico, al calore e a mediatori lipidici. L’ingresso di calcio dipendente da VRL-1 regola l’eccitabilità di membrana, il rimodellamento del citoscheletro e il traffico vescicolare, collegando l’attività del canale alla segnalazione Ca²⁺/calmodulina, alle risposte MAPK e a programmi trascrizionali a valle. Nelle linee immunitarie e mieloidi, TRPV2 è stato implicato nella chemiotassi e nella funzione fagocitica, mentre in contesti eccitabili e stromali può influenzare la migrazione cellulare e gli stati di differenziazione. La segnalazione deregolata di TRPV2 è stata studiata in modelli di infiammazione, in vie correlate al dolore neuropatico, nelle risposte allo stress dei cardiomiociti e in fenotipi associati ai tumori, a supporto del suo valore come bersaglio meccanicistico nella ricerca focalizzata sulle vie di segnalazione.

Le particelle di attivazione lentivirale VRL-1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di TRPV2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale VRL-1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione TRPV2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di VRL-1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo TRPV2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.