VPAC1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423678

Panoramica

Vipr1 codifica VPAC1, un recettore accoppiato a proteina G di classe B che lega il peptide intestinale vasoattivo (VIP) e il polipeptide attivante l’adenilato ciclasi ipofisaria, accoppiandosi prevalentemente a Gs e aumentando i livelli intracellulari di cAMP. La segnalazione di VPAC1 attiva programmi trascrizionali dipendenti da PKA/CREB e può intersecarsi con le vie MAPK e PI3K per regolare la proliferazione e la differenziazione cellulare, la funzione di barriera epiteliale e le risposte citochiniche. Nei tessuti murini, VPAC1 contribuisce a circuiti neuroendocrini e immunoregolatori, inclusa la modulazione della segnalazione infiammatoria e dell’attività della muscolatura liscia/secretoria. La deregolazione dell’asse VIP–VPAC1 è stata implicata in modelli di malattia infiammatoria intestinale, infiammazione delle vie aeree tipo asma e segnalazione del microambiente associato ai tumori, a supporto di studi meccanicistici dei processi immunitari ed epiteliali guidati dai GPCR.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO VPAC1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Vipr1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Vipr1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Vipr1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina VPAC1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Vipr1 per lo studio della segnalazione di VPAC1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Vipr1 critici per la funzione di VPAC1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Vipr1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal VPAC1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal VPAC1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Vipr1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal VPAC1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR VPAC1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Vipr1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Vipr1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.