VAMP-2 Plasmide Double Nickase (m): sc-423650-NIC

Vamp2 codifica la proteina di membrana associata alle vescicole 2 (VAMP-2; sinaptobrevina-2), una v-SNARE centrale che si appaia con t-SNARE quali SNAP25 e le sintassine per promuovere la fusione di membrana durante l’esocitosi regolata. Nei neuroni e nelle cellule neuroendocrine del topo, VAMP-2 è essenziale per l’ancoraggio (docking) delle vescicole sinaptiche e il rilascio di neurotrasmettitori, e contribuisce anche a fasi del traffico vescicolare legate al riciclo dall’endosoma alla membrana plasmatica. Attraverso cicli di assemblaggio e disassemblaggio del complesso SNARE coordinati da NSF/α-SNAP, VAMP-2 aiuta a mantenere il turnover delle vescicole presinaptiche e la secrezione accoppiata allo stimolo. Alterazioni della funzione degli SNARE e della dinamica di fusione vescicolare sono ampiamente studiate nel contesto dei meccanismi del neurosviluppo e delle neurodegenerazioni, nonché di fenotipi metabolici che coinvolgono una segnalazione dipendente dalla secrezione.

VAMP-2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Vamp2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Vamp2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Vamp2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Vamp2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.