USP17L2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-417603-ACT

USP17L2 (ubiquitin specific peptidase 17 like family member 2) è un enzima deubiquitinante umano implicato nella regolazione della stabilità proteica e della dinamica dei segnali cellulari attraverso la rimozione dell’ubiquitina dai substrati bersaglio. Come parte del sistema ubiquitina–proteasoma, i membri della famiglia USP17 sono associati al controllo della progressione del ciclo cellulare, della segnalazione di recettori e chinasi e alla modulazione delle risposte immunitarie innate e infiammatorie tramite la regolazione fine di vie dipendenti dall’ubiquitina. Alterazioni nella deubiquitinazione possono rimodellare i programmi associati a MAPK/ERK e NF-κB, influenzando proliferazione, risposte allo stress e output trascrizionali. La disregolazione delle reti di segnalazione dell’ubiquitina che includono i paraloghi di USP17 è spesso studiata in biologia del cancro e nei meccanismi delle malattie immuno-correlate, come contributore dipendente dal contesto a una segnalazione cellulare aberrante.

USP17L2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di USP17L2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

USP17L2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus USP17L2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione USP17L2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di USP17L2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus USP17L2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da USP17L2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via USP17L2 nelle cellule tumorali con espressione di USP17L2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.