USF-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401713

Panoramica

USF2 codifica l’upstream stimulatory factor 2 (USF-2), un fattore di trascrizione ubiquitario bHLH-leucine zipper che si lega ai motivi E-box e modula l’espressione genica basale e quella indotta da stimoli. USF-2 partecipa al controllo trascrizionale dell’omeostasi metabolica, della progressione del ciclo cellulare, della differenziazione e delle risposte allo stress attraverso una regolazione coordinata dell’architettura dei promotori e del contesto della cromatina. La sua attività si interseca con vie che governano il metabolismo di glucosio e lipidi, la segnalazione infiammatoria e lo stress ossidativo, e può influenzare programmi trascrizionali collegati alla biologia tumorale. Alterazioni dell’espressione o della funzione di USF2 sono state associate a proliferazione disregolata e a fenotipi metabolici, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici sul rimodellamento delle reti trascrizionali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO USF-2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene USF2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del USF2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto USF2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina USF-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di USF2 per lo studio della segnalazione di USF-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni USF2 critici per la funzione di USF-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di USF2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal USF-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal USF-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus USF2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal USF-2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR USF-2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia USF2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio USF2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.