UQCRC1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404435-ACT

Das humane Gen **UQCRC1** kodiert das Ubiquinol-Cytochrom-c-Reduktase-Kernprotein 1, eine essenzielle strukturelle Komponente des mitochondrialen Atmungskettenkomplexes III (Cytochrom-bc1) in der inneren Mitochondrienmembran. Durch die Unterstützung des Elektronentransfers von Ubiquinol auf Cytochrom c und die Stabilisierung der Assemblierung von Komplex III trägt UQCRC1 zur oxidativen Phosphorylierung, zur Aufrechterhaltung des mitochondrialen Membranpotentials und zur Regulation reaktiver Sauerstoffspezies bei. Störungen der Komplex-III-Funktion können den zellulären Energiestoffwechsel verschieben, die Anfälligkeit für Apoptose beeinflussen und redoxabhängige Signalwege verändern. In der Literatur wurden eine veränderte UQCRC1-Expression oder eine Dysfunktion des mitochondrialen Komplexes III mit mitochondrialen Erkrankungen sowie mit weiteren Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, die durch beeinträchtigte Bioenergetik und oxidativen Stress gekennzeichnet sind.

UQCRC1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen UQCRC1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

UQCRC1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des UQCRC1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der UQCRC1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen UQCRC1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native UQCRC1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von UQCRC1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des UQCRC1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem UQCRC1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.