UQCRC1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404435-ACT

L’UQCRC1 umano codifica la proteina core 1 della ubiquinolo–citocromo c reduttasi, un componente strutturale essenziale del complesso III (citocromo bc1) della catena respiratoria mitocondriale nella membrana mitocondriale interna. Supportando il trasferimento di elettroni dall’ubiquinolo al citocromo c e stabilizzando l’assemblaggio del complesso III, UQCRC1 contribuisce alla fosforilazione ossidativa, al mantenimento del potenziale di membrana mitocondriale e alla regolazione delle specie reattive dell’ossigeno. Un’alterazione della funzione del complesso III può spostare il metabolismo energetico cellulare, influenzare la suscettibilità all’apoptosi e modificare le vie di segnalazione dipendenti dallo stato redox. In letteratura, un’espressione alterata di UQCRC1 o una disfunzione del complesso III mitocondriale sono state collegate a patologie mitocondriali e a contesti patologici più ampi caratterizzati da bioenergetica compromessa e stress ossidativo.

UQCRC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di UQCRC1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

UQCRC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus UQCRC1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione UQCRC1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di UQCRC1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus UQCRC1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da UQCRC1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via UQCRC1 nelle cellule tumorali con espressione di UQCRC1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.