ULK1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400516-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ULK1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ULK1 Double Nickase Plasmid (h) e il ULK1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ULK1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ULK1 Antibody (F-4): sc-390904
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ULK1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400516-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ULK1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400516-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ULK1 (UNC-51 like autophagy activating kinase 1) è una chinasi serina/treonina che avvia l’autofagia integrando i segnali nutrizionali ed energetici provenienti da mTORC1 e AMPK. In quanto nucleo catalitico del complesso ULK1, fosforila bersagli a valle per promuovere la formazione del fagoforo e regolare la mitofagia, la proteostasi e l’adattamento cellulare allo stress metabolico. L’autofagia dipendente da ULK1 interseca la segnalazione dell’immunità innata, le vie di sopravvivenza cellulare e il controllo di qualità degli organelli, processi spesso alterati nei contesti di cancro, neurodegenerazione e malattie infiammatorie. Un’attività di ULK1 deregolata è stata associata a una diversa tolleranza allo stress e a un rimodellamento metabolico, rendendola un nodo ampiamente utilizzato per l’analisi delle vie di segnalazione in modelli di cellule umane.
ULK1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ULK1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ULK1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ULK1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ULK1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.