UGT8 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m2): sc-423604-KO-2

Panoramica

Ugt8a codifica la UDP-galattosio:ceramide galattosiltransferasi (UGT8), una glicosiltransferasi residente nel Golgi che catalizza la formazione del galattosilceramide, un precursore chiave per il solfatide e altri galattolipidi. Questo passaggio enzimatico sostiene la biosintesi degli sfingolipidi e dei lipidi della mielina, influenzando la composizione dei microdomini di membrana, le interazioni assoni–glia e la maturazione degli oligodendrociti nel sistema nervoso del topo. Alterazioni dell’equilibrio dei galattolipidi sono state associate a una mielinizzazione disregolata e a fenotipi neuroinfiammatori, rendendo UGT8 un nodo rilevante per lo studio della biologia neuronale e gliale guidata dai lipidi. L’attività di UGT8 viene inoltre utilizzata per indagare più in generale il flusso della ceramide e il rimodellamento delle vie dei glicosfingolipidi in condizioni di sviluppo o di stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO UGT8 (m2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ugt8a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ugt8a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ugt8a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina UGT8.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ugt8a per lo studio della segnalazione di UGT8, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ugt8a critici per la funzione di UGT8
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ugt8a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal UGT8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal UGT8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ugt8a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal UGT8 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR UGT8 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ugt8a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ugt8a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.