UGT1A9 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-417693-LAC

UGT1A9 umano codifica la UDP‑glucuronosiltransferasi 1A9, un enzima di fase II del metabolismo associato al reticolo endoplasmatico che coniuga l’acido glucuronico a diversi xenobiotici e substrati endogeni per aumentarne la solubilità e favorirne l’eliminazione. Opera all’interno di reti di glucuronidazione epatiche ed extraepatiche che modulano l’esposizione cellulare a piccole molecole e influenzano a valle lo stress ossidativo e la segnalazione infiammatoria. Variazioni nell’espressione o nell’attività di UGT1A9 sono associate a differenze interindividuali nella disposizione dei farmaci e nella suscettibilità a risposte avverse, e sono state esplorate in contesti quali la funzione epatica, la gestione renale dei metaboliti e la farmacologia oncologica. In quanto determinante chiave del metabolismo di coniugazione, UGT1A9 è ampiamente utilizzato per studiare la capacità di detossificazione, il crosstalk delle vie con i trasportatori e la regolazione da parte dei recettori nucleari.

Le particelle di attivazione lentivirale UGT1A9 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di UGT1A9 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale UGT1A9 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione UGT1A9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di UGT1A9. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo UGT1A9 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.