TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400458-NIC

NKX2-1 codifica TTF-1 (thyroid transcription factor 1), un fattore di trascrizione homeobox che si lega al DNA e che indirizza la specificazione di linea e i programmi di differenziamento in tiroide, polmone e prosencefalo ventrale. TTF-1 regola l’identità epiteliale e l’organogenesi coordinando reti trascrizionali che controllano la morfogenesi, le vie di biosintesi ormonale nel tessuto tiroideo e l’espressione dei geni del surfattante polmonare nell’epitelio delle vie aeree e degli alveoli. Attraverso interazioni con cofattori e complessi regolatori della cromatina, NKX2-1 integra segnali dello sviluppo per mantenere stati di espressione genica specifici del tessuto. La deregolazione di NKX2-1 è implicata in disturbi congeniti dello sviluppo ed è frequentemente studiata in biologia del cancro come regolatore associato alla linea cellulare nei tumori della tiroide e del polmone.

TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NKX2-1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NKX2-1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NKX2-1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NKX2-1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.