TrpRS Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423692

Panoramica

Wars codifica la triptofanil-tRNA sintetasi (TrpRS), un’aminoacil-tRNA sintetasi citosolica che lega la L-triptofano al suo tRNATrp cognato, fornendo il tRNA caricato necessario per un’accurata traduzione dell’mRNA. Controllando la carica del tRNA e sostenendo l’allungamento ribosomiale, TrpRS contribuisce a collegare la disponibilità di nutrienti alla sintesi proteica e ai programmi cellulari di adattamento allo stress. La perturbazione dell’attività delle aminoacil-tRNA sintetasi può influenzare la proteostasi, la segnalazione integrata dello stress e la fedeltà della traduzione, processi spesso implicati in infiammazione, neurodegenerazione e trasformazione oncogena. Wars nel topo rappresenta quindi un nodo utile per studiare come una capacità traduttiva alterata rimodelli lo stato cellulare e fenotipi rilevanti per la malattia, in vitro e in vivo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TrpRS (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Wars in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Wars insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Wars a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TrpRS.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Wars per lo studio della segnalazione di TrpRS, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Wars critici per la funzione di TrpRS
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Wars per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TrpRS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TrpRS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Wars. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TrpRS Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TrpRS (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Wars per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Wars definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.