TRPM5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403223

Panoramica

TRPM5 (transient receptor potential cation channel subfamily M member 5) è un canale cationico monovalente attivato dal Ca2+ che depolarizza la membrana plasmatica in risposta a segnali di calcio intracellulari. Agisce a valle della segnalazione della fosfolipasi C e del rilascio di Ca2+ mediato da IP3, modulando l’attività elettrica evocata dallo stimolo e l’amplificazione del segnale in tipi cellulari chemosensoriali e secretori. L’attività di TRPM5 è collegata a vie guidate dai GPCR coinvolte nella trasduzione del gusto e in altre risposte cellulari calcio-dipendenti, influenzando l’eccitabilità e i programmi trascrizionali a valle. Un’espressione o una funzione deregolata di TRPM5 è stata associata ad alterazioni della segnalazione sensoriale ed è stata studiata anche nel contesto del comportamento delle cellule tumorali e di fenotipi di segnalazione metabolica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TRPM5 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TRPM5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TRPM5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TRPM5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TRPM5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TRPM5 per lo studio della segnalazione di TRPM5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TRPM5 critici per la funzione di TRPM5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TRPM5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TRPM5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TRPM5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TRPM5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TRPM5 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TRPM5 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TRPM5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TRPM5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.