TRPC6 Plasmide Double Nickase (m): sc-423517-NIC

Trpc6 codifica TRPC6, un canale cationico non selettivo sensibile al diacilglicerolo, che media l’ingresso di Ca²⁺ attivato da recettore e modella la dinamica del calcio intracellulare in molteplici tipi cellulari murini. TRPC6 integra la segnalazione a valle dei GPCR e dei recettori tirosin-chinasici tramite vie dipendenti dalla PLC, influenzando la segnalazione calcineurina/NFAT, il rimodellamento del citoscheletro e le risposte meccanosensibili. Nel rene, l’attività di TRPC6 è strettamente legata alla funzione dei podociti e alla segnalazione del diaframma a fessura, e un’alterazione dell’attività del canale è stata associata a fenotipi di danno glomerulare in modelli sperimentali. TRPC6 è anche studiato nella muscolatura liscia vascolare e in contesti immunitari, dove l’ingresso di Ca²⁺ modula contrattilità, migrazione e programmi trascrizionali rilevanti per infiammazione e rimodellamento.

TRPC6 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Trpc6 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Trpc6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Trpc6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Trpc6 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.