TRPC6 Plasmide Double Nickase (h): sc-401205-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TRPC6 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TRPC6 Double Nickase Plasmid (h) e il TRPC6 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TRPC6. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TRPC6 Antibody (B-10): sc-515837
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TRPC6 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401205-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TRPC6 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401205-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TRPC6 codifica un canale TRP non selettivo permeabile al calcio, attivato a valle della segnalazione Gq/PLC e dal diacilglicerolo, che collega la stimolazione recettoriale alla depolarizzazione di membrana e alla dinamica intracellulare del Ca2+. L’ingresso di Ca2+ mediato da TRPC6 regola il rimodellamento del citoscheletro, la contrattilità e programmi trascrizionali attraverso vie che includono calcineurina–NFAT e altri effettori calcio-sensibili, con ruoli di rilievo nei podociti e nelle cellule muscolari lisce vascolari. Un’attività di TRPC6 deregolata e un’espressione alterata del canale sono associate a nefropatie proteinuriche, inclusa la glomerulosclerosi focale segmentaria familiare e sporadica, e sono state studiate anche nei contesti di fibrosi renale e rimodellamento vascolare.
TRPC6 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TRPC6 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TRPC6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TRPC6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TRPC6 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.