TRPC2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423513

Panoramica

Trpc2 codifica TRPC2, un membro della famiglia dei canali cationici TRPC (transient receptor potential canonical), che regola l’ingresso di Ca2+ mediato dai recettori a valle della segnalazione della fosfolipasi C. Nel topo, TRPC2 è strettamente associato alla trasduzione dei segnali sensoriali nel sistema vomeronasale, dove l’entrata di calcio modella l’eccitabilità neuronale e le vie a valle dipendenti da MAPK/CaM che influenzano i programmi dei geni a risposta immediata. Attraverso questi processi calcio-dipendenti, Trpc2 contribuisce a comportamenti evocati dai feromoni e all’accoppiamento neuroendocrino, risultando quindi rilevante per studi su chemosensazione, funzione dei circuiti neurali e fenotipi associati al comportamento. L’alterazione di Trpc2 è comunemente utilizzata per indagare come le dinamiche del calcio mediate dai canali TRP coordinino l’elaborazione sensoriale e le risposte dell’organismo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TRPC2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Trpc2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Trpc2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Trpc2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TRPC2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Trpc2 per lo studio della segnalazione di TRPC2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Trpc2 critici per la funzione di TRPC2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Trpc2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TRPC2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TRPC2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Trpc2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TRPC2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TRPC2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Trpc2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Trpc2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.