TRIM10 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422691

Panoramica

TRIM10 (Trim10) nel topo codifica una ligasi E3 dell’ubiquitina contenente un motivo tripartito, implicata nel controllo ubiquitina-dipendente della stabilità proteica e del turnover dei complessi di segnalazione. Le proteine della famiglia TRIM partecipano comunemente alla regolazione della segnalazione dell’immunità innata, delle risposte allo stress e di processi legati al citoscheletro o alla differenziazione, attraverso la modulazione dell’ubiquitinazione e della proteostasi. In ambito ematopoietico, le proteine TRIM sono spesso associate a programmi di impegno di linea e maturazione, rendendo Trim10 di interesse per lo studio delle reti regolatorie legate all’eritropoiesi e, più in generale, della biologia delle cellule immunitarie. Un’attività deregolata della via dell’ubiquitina è una caratteristica ricorrente nei meccanismi delle malattie infiammatorie ed ematologiche, a supporto dell’uso della perturbazione di Trim10 per interrogare le dipendenze di via in modelli murini pertinenti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TRIM10 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Trim10 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Trim10 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Trim10 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TRIM10.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Trim10 per lo studio della segnalazione di TRIM10, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Trim10 critici per la funzione di TRIM10
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Trim10 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TRIM10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TRIM10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Trim10. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TRIM10 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TRIM10 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Trim10 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Trim10 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.