Trichohyalin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401940-ACT

TCHH codifica la tricohialina, una proteina strutturale altamente reticolata, arricchita nella guaina interna della radice dei follicoli piliferi e nei cheratinociti in differenziamento. La tricohialina è un importante substrato delle deiminasi della peptidilarginina e delle transglutaminasi, favorendo la citrullinazione e la reticolazione tramite legami isopeptidici che stabilizzano l’involucro corneificato e rafforzano la meccanica della barriera epiteliale. Attraverso la sua integrazione con i filamenti intermedi di cheratina e con il programma di cheratinizzazione, TCHH contribuisce alla morfogenesi follicolare, all’architettura del fusto del capello e alla differenziazione epidermica. Un’espressione o un processamento deregolarizzati della tricohialina sono stati associati a fenotipi di capelli e pelle, rendendola rilevante per studi sulla biologia del follicolo, sui disturbi della barriera e sulle risposte allo stress epiteliale.

Trichohyalin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TCHH senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Trichohyalin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TCHH nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TCHH, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Trichohyalin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TCHH nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Trichohyalin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Trichohyalin nelle cellule tumorali con espressione di TCHH silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.