TREM-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425490

Panoramica

Il recettore innescante espresso sulle cellule mieloidi 1 (TREM-1) è un immunorecettore presente prevalentemente su neutrofili e monociti/macrofagi che amplifica le risposte infiammatorie avviate dai recettori di riconoscimento dei pattern. Nel topo, la segnalazione di TREM-1 si integra con vie mediate da adattatori per potenziare l’attivazione di NF-κB e MAPK, aumentando la produzione di citochine e chemochine proinfiammatorie e rafforzando le funzioni effettrici dell’immunità innata. L’attività di Trem1 è strettamente legata al reclutamento e all’attivazione delle cellule mieloidi e al dialogo con i compartimenti endoteliale e stromale durante l’infiammazione acuta e cronica. Una segnalazione di TREM-1 deregolata è stata associata a modelli di malattie infiammatorie e infettive, nonché a fenotipi mieloidi associati al tumore e a vie di danno tissutale guidate da risposte citochiniche eccessive.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TREM-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Trem1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Trem1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Trem1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TREM-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Trem1 per lo studio della segnalazione di TREM-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Trem1 critici per la funzione di TREM-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Trem1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TREM-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TREM-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Trem1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TREM-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TREM-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Trem1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Trem1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.