TRAP-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402963-NIC

TGFBRAP1 codifica TRAP-1, un adattatore intracellulare associato al complesso recettoriale del transforming growth factor-β (TGF-β), che supporta il traffico del recettore, l’assemblaggio dei complessi di segnalazione e la modulazione delle vie a valle. Influenzando l’equilibrio tra le risposte trascrizionali SMAD-dipendenti e il crosstalk con MAPK e altre vie sensibili allo stress, TRAP-1 contribuisce alla regolazione della proliferazione e della differenziazione cellulare, nonché dell’omeostasi della matrice extracellulare. Un controllo alterato della via del TGF-β è implicato nella fibrosi, nella regolazione immunitaria e in cambiamenti associati al cancro nella plasticità epitelio–mesenchimale e nel rimodellamento del microambiente, rendendo TGFBRAP1 un nodo utile per studi meccanicistici. La funzione di TRAP-1 nell’uomo è anche rilevante per comprendere come le impalcature (scaffold) associate al recettore modulino ampiezza e durata del segnale in contesti specifici.

TRAP-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TGFBRAP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TGFBRAP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TGFBRAP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TGFBRAP1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.