Tom70 Plasmide Double Nickase (m): sc-424331-NIC

Il gene murino **Tomm70a** codifica **Tom70**, un recettore di importazione della membrana esterna mitocondriale che riconosce segnali di targeting interni e coopera con gli chaperoni per convogliare proteine precursori idrofobiche verso il complesso **TOM** per la traslocazione. Tom70 sostiene la proteostasi mitocondriale e la capacità bioenergetica facilitando l’importazione di proteine carrier e di altri componenti mitocondriali codificati dal nucleo, collegandosi così alla fosforilazione ossidativa e all’adattamento metabolico. L’alterazione dell’importazione dipendente da Tom70 può favorire la segnalazione di stress mitocondriale, modificare la gestione delle specie reattive dell’ossigeno e rimodellare, a livello mitocondriale, le vie dell’apoptosi e dell’immunità innata. La deregolazione dell’importazione proteica mitocondriale e della funzione dei recettori della membrana esterna è rilevante per meccanismi studiati nella neurodegenerazione, nella disfunzione cardiometabolica e nel metabolismo delle cellule tumorali.

Tom70 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Tomm70a nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Tomm70a. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Tomm70a. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Tomm70a interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.