Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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Tom1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423467
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Tom1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Tom1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Tom1 Antibody (H-5): sc-514430
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Tom1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-423467 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Tom1 (bersaglio di Myb1) codifica una proteina adattatrice endosomiale che collega il carico ubiquitinato al macchinario di traffico associato a ESCRT, contribuendo alla maturazione degli endosomi e allo smistamento lisosomiale. Attraverso interazioni con componenti legati alla clatrina e a ESCRT, TOM1 aiuta a regolare il turnover dei recettori, l’omeostasi delle proteine di membrana e l’attenuazione del segnale dopo l’endocitosi. Questi processi si intrecciano con la funzione autofagia–lisosoma e con la segnalazione dell’immunità innata, rendendo Tom1 rilevante per studiare come il trasporto vescicolare moduli l’infiammazione e le risposte cellulari allo stress. Alterazioni nello smistamento endosomiale e nel traffico dipendente dall’ubiquitina sono spesso associate, nei modelli murini, a fenotipi neuroinfiammatori e neurodegenerativi, nonché a disregolazione immunitaria.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Tom1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tom1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tom1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tom1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Tom1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tom1 per lo studio della segnalazione di Tom1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Tom1 critici per la funzione di Tom1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tom1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Tom1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Tom1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tom1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Tom1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Tom1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tom1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tom1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.