TNIK Plasmide Double Nickase (h): sc-401523-NIC

TNIK (TRAF2 and NCK interacting kinase) codifica una chinasi serina/treonina della famiglia delle chinasi del centro germinativo che integra segnali che controllano l’organizzazione del citoscheletro, la polarità cellulare e i programmi trascrizionali. TNIK funziona come regolatore della segnalazione Wnt/β-catenina attraverso interazioni con i complessi trascrizionali TCF/LEF e contribuisce a vie che influenzano adesione, migrazione e sviluppo neuronale. Un’attività o un’espressione deregolata di TNIK è stata associata a un output aberrante della via Wnt e a fenotipi proliferativi o invasivi alterati in molteplici contesti patologici, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici sul controllo delle reti di segnalazione. Nelle cellule umane, TNIK è anche studiato per i suoi ruoli nella funzione sinaptica e nel cross-talk della segnalazione guidata da chinasi che plasma le transizioni di stato cellulare.

TNIK Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TNIK nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TNIK. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TNIK. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TNIK interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.