TIS11D Plasmide Double Nickase (h): sc-405406-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TIS11D Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TIS11D Double Nickase Plasmid (h) e il TIS11D Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ZFP36L2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TIS11D Antibody (A-3): sc-365908
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TIS11D Plasmide Double Nickase (h) | sc-405406-NIC | 20 µg | $410.00 |
ZFP36L2 umano codifica la proteina legante l’RNA TIS11D, un fattore a dita di zinco di tipo CCCH che riconosce elementi ricchi in AU nelle 3′ UTR per promuovere la deadenilazione e la degradazione degli mRNA. Regolando la stabilità dei trascritti, TIS11D modella programmi di espressione genica legati allo sviluppo, all’attivazione e alla differenziazione dei linfociti, intersecandosi con la segnalazione infiammatoria associata a MAPK e NF-κB e con reti più ampie di controllo post-trascrizionale. ZFP36L2 è stato implicato nell’omeostasi immunitaria e in fenotipi oncogenici in contesti ematologici, in cui un turnover dell’RNA alterato può influenzare proliferazione, apoptosi e impegno di linea. Queste caratteristiche rendono ZFP36L2 un nodo utile per analizzare le vie di degradazione dell’RNA e gli output trascrizionali legati all’immunità in modelli cellulari umani.
TIS11D Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ZFP36L2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ZFP36L2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ZFP36L2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ZFP36L2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.