TIS11D Double Nickase Plasmid (h): sc-405406-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TIS11D Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TIS11D Double-Nickase-Plasmid (h) und TIS11D Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ZFP36L2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TIS11D: sc-365908
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TIS11D Double Nickase Plasmid (h) | sc-405406-NIC | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen ZFP36L2 kodiert das RNA-bindende Protein TIS11D, einen CCCH-Typ-Zinkfingerfaktor, der AU-reiche Elemente in 3′-UTRs erkennt und so Deadenylierung und Abbau von mRNA fördert. Über die Regulation der Transkriptstabilität prägt TIS11D Genexpressionsprogramme, die mit Entwicklung, Aktivierung und Differenzierung von Lymphozyten verknüpft sind, und greift dabei in MAPK- und NF-κB-assoziierte inflammatorische Signalwege sowie in breitere posttranskriptionelle Kontrollnetzwerke ein. ZFP36L2 wird mit Immunhomöostase und onkogenen Phänotypen in hämatologischen Kontexten in Verbindung gebracht, in denen eine veränderte RNA-Umsatzrate Proliferation, Apoptose und Linienfestlegung beeinflussen kann. Diese Eigenschaften machen ZFP36L2 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um RNA-Abbauwege und immunbezogene transkriptionelle Outputs in humanen Zellmodellen zu untersuchen.
TIS11D Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ZFP36L2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ZFP36L2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ZFP36L2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ZFP36L2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.